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流式细胞术是一种常用的细胞分析技术,可以用于检测单克隆抗体L1Mab-13对hPD-L1的结合情况。以下是具体步骤:
1. 准备样本:收集含有hPD-L1的细胞或组织样本,如肿瘤组织、癌细胞株等。
2. 细胞处理:将样本进行适当处理,如离心、消化、过筛等操作,获得单个活性的单个细胞。
3. 绑定抗体:将L1Mab-13与待检测的单个活性单个细胞混合,在室温下孵育一段时间(通常为30分钟至60分钟)。
4. 洗涤:使用缓冲液洗涤混合物以去除未结合抗体和其他杂质,并保持目标生物分子完整和稳定。
5. 标记荧光素:加入荧光素标记二抗以诱导荧光信号,并在流式仪中检测被标记的靶分子(即hPD-L1)与L1Mab-13之间是否发生特异性结合反应。
6. 流式仪检测: 将样品注入到流式仪中进行数据采集和分析。在流式仪中,细胞会被单个地通过激光束,荧光素标记的抗体会发出特定波长的荧光信号。通过检测这些信号,可以确定L1Mab-13是否与hPD-L1结合。
以上是使用流式细胞术检测单克隆抗体L1Mab-13对hPD-L1的结合情况的基本步骤。需要注意的是,在实验过程中应该严格控制各项条件,并进行适当负对照和阳性对照以确保结果准确可靠。
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